作者：電泳設(shè)備中電泳呈現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，英文成為smear，就是彌散。其原因，主要從以下兩個(gè)方面考慮：1、PCR產(chǎn)品本身原因：往往由于酶量過(guò)多或酶的質(zhì) 來(lái)源： 發(fā)布時(shí)間：2020-10-13 12:43:47 瀏覽量：
電泳設(shè)備中電泳呈現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，英文成為smear，就是彌散。其原因，主要從以下兩個(gè)方面考慮：
1、PCR產(chǎn)品本身原因：
往往由于酶量過(guò)多或酶的質(zhì)量差，dNTP濃度過(guò)高，Mg2+濃度過(guò)高，
退火溫度過(guò)低，循環(huán)次數(shù)過(guò)多，而造成PCR的非特異性產(chǎn)品過(guò)多。
對(duì)策：
①削減Taq酶的量，或調(diào)換另一來(lái)源的酶。
②削減dNTP的濃度。
③恰當(dāng)下降Mg2+濃度。
④添加模板量，削減引物的用量，削減循環(huán)次數(shù)，提高退火溫度。
2、電泳體系的問(wèn)題：
（1）電泳緩沖液TAE或許TBE的污染，建議替換緩沖液。
（2）上樣時(shí)樣品漂了，建議添加上樣緩沖液的用量，以及當(dāng)心加樣。
（3）電壓太高。
（4）恰當(dāng)把你的膠的濃度加大。（根據(jù)你的片斷巨細(xì)而定）
（5）調(diào)查你的marker是否也存在拖尾現(xiàn)象，作為對(duì)照。
PCR拖尾及假陽(yáng)性的原因及對(duì)策
拖尾現(xiàn)象：產(chǎn)品在凝膠上呈Smear狀態(tài)。
原因：
1.模板不純
2.Buffer不合適
3.退火溫度偏低
4.酶量過(guò)多
5.dNTP、Mg2+濃度偏高
6.循環(huán)次數(shù)過(guò)多
對(duì)策：
1.純化模板
2.替換Buffer
3.恰當(dāng)提高退火溫度
4.適量用酶
5.恰當(dāng)下降dNTP和鎂離子的濃度
6.削減循環(huán)次數(shù)
假陽(yáng)性
現(xiàn)象：空白對(duì)照呈現(xiàn)意圖擴(kuò)增產(chǎn)品
原因：
靶序列或擴(kuò)增產(chǎn)品的穿插污染
對(duì)策：
1.操作時(shí)應(yīng)當(dāng)心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內(nèi)或?yàn)R起離心管外；
2.除酶及不能耐高溫的物質(zhì)外，一切試劑或器材均應(yīng)高壓消毒。所用離心管及加樣槍頭號(hào)均應(yīng)一次性運(yùn)用。
